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技术支持

液相色谱柱通论
发布时间:2016-12-06   点击次数:739次

选择液相色谱柱简单思路
1. 确定分离目的      确定你的应用是否要求高分离度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命,低的操作成本等等。
2. 评估分析物的化学性质      评估分析物的化学性质. . 诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。
3. 选择合适的色谱柱      了解色谱填料的物理和化学性质。

A填料基质

硅胶基质:纯度高成本低,强度大,化学修饰容易, 但pH值范围有限。大多硅胶基质填料在pH2-8之间稳定,但经过特殊修饰的硅胶键合相可以稳定在pH1.5-10。
聚合物基质:应用pH值范围宽,温度稳定(高温可以达到80度以上),机械强度小。
B颗粒形状
    大多现代HPLC填料都是球形颗粒,但有时是不规则的颗粒。球形颗粒提供较低的柱压、较高的柱效和稳定性以及较长的柱寿命在使用高粘度的流动相时;不规则颗粒有较大比表面积和相对低廉的价格。

C颗粒粒径

粒径越小柱效越高、分离度越高,但同时会导致较高柱压降。选择1.5-3µm的填料以解决一些复杂样品,UPLC可以使用1.5µm的填料;另外10µm或更大粒径的填料用作半制备或制备柱。

D 含碳量

含碳量指的是硅胶表面键合相的比例,与比表面积和键合覆盖度等有关。高含碳量提高柱容量、分辨率及分析时间,用于要求高分离度的复杂样品;低含碳量分析时间短、展现不同的选择性,用于快速分析简单样品及需要高含水流动相条件的样品。一般C18的含碳量在7-19%不等。

E孔径和比表面积   

HPLC吸附介质是多孔的颗粒,绝大多数的反应表面于孔内。因此,分子必须进入孔内才能被吸附和分离。
孔径和比表面积是相辅相成的两个概念。孔径小比表面积大,反之亦然。比表面积大,增加样品与键合相之间的反应,增加保留,上样量和复杂成分的分离度;比表面积小,平衡时间快,适合梯度分析。

F孔容和机械强度

孔容,又称“孔体积”。 指单位颗粒的空隙体积大小。它能很好的反应填料的机械强度。孔体积大的填料相对孔体积小的填料机械强度要略弱。孔体积为1.5mL/g  或更小的填料大多用于HPLC分离,而孔体积大于1.5mL/g  的填料使用于尺寸排阻色谱和低压色谱。

G封端封端

封端能够降低极性碱性化合物因为与裸露的硅醇基相互作用而产生的拖尾峰。不封端键合相相对封端键合相会产生不同的选择性,尤其是极性样品。

色谱填料分类(键合相)

1 s硅胶柱适用于能溶于有机溶剂的低分子量化合物的分离。硅胶柱上的分离与样品中化合物的官能团方
位、类型和数量有关。在制备色谱技术中,正相色谱技术有很大优势,因为纯化以后的样品只需要蒸发掉溶剂即
可得到纯净化合物,不象反相色谱那样需要费时的冷冻干燥。

2 ODS/C8/C4等反相柱

ODS使用单官能团键合剂在优化的条件下达到高密度键合覆盖率的一种十八烷基键合相硅胶吸附剂,耐用的小分子HPLC柱,,C18柱常和水/甲醇或者水/乙腈流动相结合使用,对于疏水性不同的小分子,蛋白质和肽类等,具有出色的分离能力 。C8与C18色谱柱相同,也是靠疏水性相互作用的机理分离样品,但是保留能力减弱。当样品极性太强或者疏水性太强而无法在C18柱上进行色谱分析时,C8柱是一个很好的选择。一些极性化合物在C8柱上能有更好的表现,由于C8键合相良好的表面覆盖率,像维生素、抗生素和碱性药物通常在C8柱上的分离要比C18柱好,而且峰形更加对称。

3NH2是一种氨丙基键合硅胶吸附相,既能用于正相分析,又能用于反相分析。氨基固定相的选择性与
C18相比,有很大差别,使得它对那些极难分析的极性化合可以达到理想的分析结果。另外,氨基柱与离子凝
胶柱相比,对糖类化合物表现出更高的分离效率。此类应用中的典型流动相是乙腈/水。在正相模式下的分离
类似于未键合的硅胶,但是梯度平衡的时间更短,寿命更长。

4 二苯基

适用于含有双键和芳香基团的化合物。与C18和苯基已烷键合相相比,不是依靠疏水保留机理,二苯基键合相主要是依靠化合物的π-电子结构的不同来获得分离。如果您需要在分析中提高芳香族和双键化合物的选择性,提高分离度以及提高样品通量。

5氰基柱

氰丙基键合硅胶吸附相,它的独特之处在于能同时用于正相和反相分离模式。当使用含水的有机流动相时,分析物的洗脱顺序和反相模式一致:极性化合物洗脱快,非极性化合物则被更多的保留。因此氰基柱可以分析那些对C18柱来说疏水性太强而且在有机溶剂中溶解性不好的化合物。氰基柱作为正相柱使用时,分离化合物的原理是基于极性相互作用。

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